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        人角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)
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          人角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)

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          BS-0186 人角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)ELISA試劑盒

          一、實(shí)驗(yàn)原理

          采用雙抗體夾心法(或雙抗原夾心法)檢測(cè)樣本中KGF濃度。通過(guò)包被抗體/抗原與待測(cè)物結(jié)合,再與酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物,經(jīng)TMB顯色后測(cè)定OD值,濃度與顏色深淺成正比。

          二、試劑盒組成

          主要組分?

          預(yù)包被微孔板(96孔或48孔)

          標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉,通常含2-8管,濃度0-400 pg/mL不等)

          酶標(biāo)抗體、生物素化抗體、HRP標(biāo)記親和素(不同品牌配置差異)

          TMB底物液、終止液(2N H?SO?)

          濃縮洗滌液(需20-30倍稀釋)

          自備物品?

          酶標(biāo)儀(450nm)、移液器及槍頭

          37℃恒溫箱、蒸餾水

          三、樣本處理

          樣本類(lèi)型 處理方法

          血清? 室溫凝固10-20分鐘后,2000-3000rpm離心20分鐘,避免溶血

          血漿? EDTA/肝素抗凝,離心后取上清

          細(xì)胞上清? 1000-3000rpm離心10-20分鐘去除顆粒

          組織勻漿? PBS勻漿后離心取上清,分裝保存于-20℃

          注意?:避免反復(fù)凍融;NaN?會(huì)抑制HRP活性,需排除此類(lèi)樣本。

          四、操作步驟

          試劑準(zhǔn)備?

          標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶:加入指定體積稀釋液(如0.5-1mL),靜置10分鐘混勻。

          洗滌液稀釋?zhuān)喊?:19~1:20比例用蒸餾水配制。

          檢測(cè)流程?

          加樣:標(biāo)準(zhǔn)品/樣本每孔50-100μL。

          孵育:37℃溫育60-120分鐘。

          洗板:手工或洗板機(jī)洗滌4-6次,拍干。

          加酶標(biāo)抗體:每孔100μL,37℃孵育60分鐘。

          顯色:加入TMB底物,避光反應(yīng)15分鐘。

          終止:加入終止液后15分鐘內(nèi)測(cè)定450nm OD值。

          五、注意事項(xiàng)

          保存條件?:未開(kāi)封試劑盒2-8℃保存;溶解后標(biāo)準(zhǔn)品建議分裝凍存。

          精密度?:批內(nèi)CV<10%,批間CV<12%。

          干擾因素?:溶血、細(xì)菌污染、反復(fù)凍融可能導(dǎo)致假陽(yáng)性或濃度偏差。

          注:以上資料僅供參考,如需具體品牌說(shuō)明可進(jìn)一步提供貨號(hào)查詢(xún)?cè)敿?xì)參數(shù)。

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