大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-3177 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒

　　以下是關(guān)于大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒的實驗使用說明書，綜合了多個來源的操作步驟和注意事項：

　　一、試劑盒組成

　　預(yù)包被板?：96孔或48孔微孔板，已包被抗Casp-9抗體?。

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉形式，需用稀釋液復(fù)溶，濃度通常為2000 pg/mL，需倍比稀釋成梯度濃度?。

　　檢測溶液?：包括生物素標(biāo)記抗體(檢測溶液A)、酶標(biāo)二抗(檢測溶液B)?。

　　洗滌液?：30倍濃縮液，需用蒸餾水稀釋?。

　　顯色底物(TMB)與終止液?：避光保存，顯色后需立即終止反應(yīng)?。

　　二、樣本處理

　　血清/血漿?：采集后室溫靜置10-20分鐘，離心(2000-3000 rpm，20分鐘)取上清，避免溶血或脂血?。

　　組織勻漿?：按重量比加入PBS勻漿，離心后取上清，分裝保存于-20℃?。

　　細(xì)胞上清?：離心去除顆粒，凍存前避免反復(fù)凍融?。

　　三、實驗步驟

　　加樣?：

　　每孔加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本(建議復(fù)孔)，隨后加入50μL生物素標(biāo)記抗體?。

　　37℃孵育1小時，洗滌3次(手工操作或洗板機(jī))?。

　　酶標(biāo)反應(yīng)?：

　　加入80μL親和鏈酶素-HRP，37℃孵育30分鐘，再次洗滌?。

　　顯色與終止?：

　　每孔加入底物A/B各50μL，避光孵育10分鐘，立即加入50μL終止液?。

　　讀數(shù)?：

　　使用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度?。

　　四、注意事項

　　試劑保存?：未開封試劑盒-20℃保存，開封后酶標(biāo)板需密封防潮，TMB和終止液需4℃避光?。

　　操作規(guī)范?：避免泡沫產(chǎn)生，加樣時需精準(zhǔn);洗滌需，防止非特異性結(jié)合?。

　　質(zhì)量控制?：建議每次實驗設(shè)置空白孔和復(fù)孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線R值應(yīng)≥0.95?。

　　樣本要求?：反復(fù)凍融不超過3次，組織樣本需新鮮處理或液氮速凍?。

　　五、常見問題

　　顯色異常?：可能因酶標(biāo)抗體失效或洗滌不充分，需檢查試劑有效期和操作步驟?。

　　背景過高?：封閉不或樣本中干擾物質(zhì)過多，可優(yōu)化封閉液濃度或稀釋樣本?。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實驗依據(jù)，具體操作請以實際試劑盒說明書為準(zhǔn)或咨詢品牌商?。

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