Elisa實(shí)驗(yàn)：ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)操作流程

　　一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

　　試劑平衡?

　　從2-8℃取出試劑盒，所有組分(包括酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)抗體等)需室溫平衡30分鐘，避免冷凝水干擾?。

　　濃縮洗滌液若有結(jié)晶，需37℃水浴至溶解?。

　　耗材檢查?

　　核對(duì)試劑盒組分與說(shuō)明書是否一致，確認(rèn)酶標(biāo)板無(wú)破損、污染?。

　　未使用的板條需密封后冷藏保存?。

　　二、標(biāo)準(zhǔn)品與樣本處理

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品需離心后加指定體積稀釋液溶解，渦旋混勻?。

　　梯度稀釋建議使用1.5mL EP管，按2倍比例逐級(jí)稀釋(如S7→S0)，每步需換槍頭并充分混勻?。

　　樣本預(yù)處理?

　　細(xì)胞上清需3000rpm離心10分鐘去除雜質(zhì)?。

　　高濃度樣本需按說(shuō)明書稀釋(如5倍)?。

　　三、加樣與孵育

　　孔位布局?

　　設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔(梯度濃度)、樣本孔(建議復(fù)孔)、空白孔(僅加稀釋液)?。

　　加樣體積通常為50-100μL，槍頭需懸空垂直加液，避免觸碰孔壁?。

　　孵育條件?

　　加入檢測(cè)抗體后，37℃避光孵育1-2小時(shí)，震蕩(300rpm)可提高結(jié)合效率?。

　　四、洗滌與顯色

　　洗板規(guī)范?

　　手工洗板：每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩干，重復(fù)3-5次，最后拍干?。

　　自動(dòng)洗板機(jī)建議設(shè)置30秒浸泡程序?。

　　顯色控制?

　　底物(如TMB)需避光操作，37℃孵育15-30分鐘，顯色至孔內(nèi)液體變藍(lán)?。

　　終止液加入后5分鐘內(nèi)需完成讀數(shù)(顏色變黃)?。

　　五、數(shù)據(jù)讀取與分析

　　酶標(biāo)儀設(shè)置?

　　雙波長(zhǎng)檢測(cè)(主波長(zhǎng)450nm，參考波長(zhǎng)630nm)，避免孔間干擾?。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合?

　　使用CurveExpert或Excel擬合4參數(shù)曲線，計(jì)算樣本濃度?。

　　六、注意事項(xiàng)

　　關(guān)鍵控制點(diǎn)?：

　　避免酶標(biāo)板長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫，孵育時(shí)需密封?。

　　不同批次試劑不可混用，HRP工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用?。

　　異常處理?：

　　顯色過(guò)淺：檢查孵育時(shí)間或底物活性?。

　　背景過(guò)高：洗滌不充分或抗體濃度過(guò)高?。

　　(注：具體操作需以試劑盒說(shuō)明書為準(zhǔn)，不同品牌可能存在細(xì)節(jié)差異?。)

　　BS-1502人內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒

　　BS-2489小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒

　　BS-3364大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISA試劑盒

　　注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，具體請(qǐng)咨詢品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師;

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